Как провести локальную верификацию нового ПЦР-теста

Локальная верификация подтверждает, что лаборатория способна получить приемлемые результаты с новым тестом в своих условиях: на своём оборудовании, со своими сотрудниками, образцами и рабочим процессом. Она не заменяет разработку и полную валидацию производителя, но проверяет наиболее важные заявленные характеристики перед рутинным использованием.

Правильная верификация начинается не с запуска случайных образцов, а с письменного протокола, заранее определённых критериев и плана действий при неприемлемом результате.

Краткий ответ

Минимальный план включает:

1. определение предназначения;
2. проверку документов;
3. анализ рисков;
4. выбор образцов;
5. оценку повторяемости;
6. проверку положительных и отрицательных результатов;
7. оценку пограничных концентраций;
8. сравнение с действующим методом;
9. анализ invalid и ошибок;
10. утверждение отчёта и СОП.

Верификация и валидация — не одно и то же

Валидация производителя

Производитель разрабатывает тест и формирует полный пакет доказательств:

• аналитическая чувствительность;
• аналитическая специфичность;
• интерференции;
• воспроизводимость;
• клиническая эффективность;
• стабильность;
• программное обеспечение;
• риск-менеджмент.

Локальная верификация

Лаборатория проверяет, может ли она воспроизвести приемлемую работу теста в своих условиях.

Если лаборатория изменяет предназначение, образец, подготовку или интерпретацию, объём работы может стать значительно больше, чем обычная верификация.

Шаг 1. Определить предназначение

Запишите:

• что выявляет тест;
• на каком образце;
• для какой группы;
• для какого решения;
• какие препараты или мишени охватывает;
• где будет использоваться;
• кто выполняет;
• как будет сообщаться результат.

Нельзя верифицировать продукт без чётко определённого intended use.

Шаг 2. Проверить документацию

До лабораторной работы запросите:

• актуальную IFU;
• техническое описание;
• аналитические отчёты;
• клинические данные;
• предел обнаружения;
• перекрёстную реактивность;
• интерференции;
• повторяемость;
• воспроизводимость;
• стабильность;
• условия хранения;
• коды ошибок;
• алгоритм повтора;
• ограничения;
• версию ПО;
• историю изменений.

Подробнее:

Как оценить клинические данные китайского ИВД-теста.

Шаг 3. Провести анализ рисков

Определите риски:

• ложноотрицательный результат;
• ложноположительный результат;
• пропуск устойчивости;
• неверная интерпретация;
• invalid;
• контаминация;
• ошибка оператора;
• неправильный образец;
• неправильная температура;
• перебои расходников;
• отказ модуля;
• ошибка ПО.

Риск определяет глубину проверки.

Шаг 4. Выбрать образцы

Желательно включить:

• отрицательные образцы;
• положительные образцы;
• разные концентрации;
• пограничные образцы;
• разные типы образцов, если они входят в предназначение;
• известные варианты;
• потенциальные интерференции;
• образцы с ранее установленным результатом;
• внешний контроль.

Не следует использовать только сильноположительные материалы.

Шаг 5. Определить размер исследования

Универсального числа нет. Объём зависит от:

• риска;
• сложности теста;
• опыта лаборатории;
• доступности образцов;
• требований системы качества;
• регуляторных правил;
• числа заявленных образцов;
• числа категорий результата.

Протокол должен объяснять, почему выбранный объём достаточен для локальной цели.

Шаг 6. Проверить повторяемость

Повторяемость можно оценивать:

• одним оператором;
• в одной серии;
• на одном приборе;
• с одной партией;
• на отрицательном, слабоположительном и положительном уровне.

Результаты должны соответствовать заранее установленным критериям.

Шаг 7. Проверить воспроизводимость

По возможности включите:

• разных операторов;
• разные дни;
• разные модули;
• разные партии;
• разные смены;
• разные приборы, если они есть.

Это помогает выявить зависимость от условий.

Шаг 8. Проверить предел обнаружения локально

Лаборатория не всегда обязана полностью повторять исследование производителя, но может проверить уровень около заявленного порога.

Важно:

• использовать подходящую матрицу;
• выполнить несколько повторов;
• фиксировать долю обнаружения;
• не заявлять новый LoD без достаточного исследования;
• отличать подтверждение заявленного уровня от разработки нового параметра.

Шаг 9. Сравнить с действующим методом

Сравнение может включать:

• текущий молекулярный тест;
• культуру;
• фенотипический DST;
• референсный метод;
• подтверждающий метод;
• составной референсный стандарт.

Необходимо заранее определить:

• что считается согласованием;
• как анализируются расхождения;
• какой метод имеет приоритет;
• требуется ли третий метод.

Шаг 10. Оценить invalid и ошибки

Запишите:

• число запусков;
• invalid;
• error;
• no result;
• indeterminate;
• повтор;
• успешный повтор;
• неуспешный повтор;
• модуль;
• партия;
• оператор.

Подробнее:

Invalid и indeterminate результаты молекулярного теста.

Пример матрицы верификации

Как задать критерии приемлемости

Критерии должны быть установлены до начала работы.

Примеры категорий:

• положительное согласование;
• отрицательное согласование;
• повторяемость;
• invalid rate;
• отсутствие систематической ошибки;
• согласование между операторами;
• корректная передача результата;
• выполнение времени процесса.

Критерий не должен придумывается после получения результата.

Что делать при неприемлемом результате

Возможные действия:

• расследовать ошибку;
• повторить часть исследования;
• заменить партию;
• провести обучение;
• проверить прибор;
• изменить СОП;
• запросить производителя;
• увеличить объём проверки;
• отказаться от внедрения;
• направить материал в референсную лабораторию.

Не следует просто удалить неудобные данные.

Верификация рабочего процесса

Проверяется не только аналитика.

Оцените:

• регистрацию образца;
• подготовку;
• биобезопасность;
• ручное время;
• загрузку;
• интерпретацию;
• LIS;
• контроль;
• утилизацию;
• хранение;
• поставку;
• сервис.

Как выбрать ПЦР-анализатор для небольшой лаборатории.

Пример iFIND

При локальной оценке iFIND необходимо отдельно проверить:

• конкретную модель S2, S4 или S8;
• конкретный картридж;
• версию ПО;
• образцы из IFU;
• время;
• правила контроля;
• частоту invalid;
• модульную независимость;
• условия хранения;
• доступность расходников.

Все параметры должны подтверждаться актуальной документацией производителя. Это не подтверждает регистрацию в России.

iFIND System.

Итоговый отчёт

Отчёт должен содержать:

1. цель;
2. предназначение;
3. продукт и версия;
4. оборудование;
5. операторы;
6. образцы;
7. протокол;
8. критерии;
9. результаты;
10. расхождения;
11. отклонения;
12. вывод;
13. ограничения;
14. необходимые действия;
15. подписи;
16. дату пересмотра.

Что важно помнить

• Верификация подтверждает локальную работоспособность.
• Она не заменяет производителя и регуляторную оценку.
• Критерии устанавливаются заранее.
• Слабоположительные и пограничные материалы особенно важны.
• Invalid и ошибки должны анализироваться.
• Изменение предназначения увеличивает объём работы.
• Неприемлемый результат нельзя скрывать.

Источники и границы доказательств

Материал основан на руководствах WHO по внедрению и выбору молекулярных тестов, практическом руководстве по усилению лабораторий и новых инструментах верификации тестов. Конкретный протокол должен соответствовать локальной системе качества и требованиям регулирующих органов.

Профессиональное уведомление

Материал предназначен для специалистов. Он не заменяет утверждённый протокол, требования системы менеджмента качества или решение ответственного руководителя лаборатории.

Связанные материалы

Дополнительные материалы: оценку частоты invalid результатов.

CTA

Нужен шаблон протокола локальной верификации?

Запросите форму протокола, таблицу образцов, критерии приемлемости и шаблон итогового отчёта.

Запросить форму верификации

Нужно ли отдельно проверять заявленный предел обнаружения

Если предел обнаружения влияет на предполагаемое использование теста, лаборатория должна оценить, соответствует ли заявление производителя типу образца, матрице, варианту подготовки и локальному рабочему процессу. Полная аналитическая валидация не всегда требуется, но критические характеристики должны быть подтверждены в заранее установленном объёме.

Подробнее: «Что означает предел обнаружения для реальной лаборатории».

Чем приёмочные испытания отличаются от верификации метода

Приёмочные испытания подтверждают, что поставленное оборудование соответствует договору, комплектно, запускается и выполняет базовые функции. Локальная верификация отвечает на другой вопрос: может ли лаборатория получить ожидаемые аналитические результаты в своих условиях.

Приёмка обычно включает идентификацию модели и серийного номера, комплектность, физическое состояние, включение, проверку модулей, программного обеспечения, связи, контрольный запуск и фиксацию дефектов.

Только после успешной приёмки следует переходить к локальной верификации.

Подробнее: пошаговый план приёмочных испытаний ПЦР-анализатора.